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【環(huán)凱原創(chuàng)】有趣的細(xì)菌拉絲試驗(yàn) — 快速區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌

發(fā)布時(shí)間： 2023-06-30　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4763次

是否有想知道平板上的分離菌的到底是革蘭氏陰性還是陽性菌，卻因沒有革蘭氏染色或沒有顯微鏡或不會革蘭氏染色操作而不知所措？或者，革蘭氏染色后還不確定標(biāo)本測試菌是革蘭氏陰性還是陽性菌的？
下面給大家介紹個(gè)簡單又有趣的解決方法 —— 細(xì)菌拉絲試驗(yàn)，不需染色劑不需顯微鏡，一分鐘輕松區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌。
此法在1970年Smith^【1】首先報(bào)道應(yīng)用去氧膽酸鈉溶液做拉絲試驗(yàn)區(qū)分弧菌與非弧菌（如氣單胞菌屬細(xì)菌），初步鑒別霍亂弧菌；1981年Shushan等^【2】和1983年Agbonlahor等^【3】相繼應(yīng)用氫氧化鉀溶液做拉絲試驗(yàn)區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌。
目前國內(nèi)細(xì)菌拉絲試驗(yàn)主要也是應(yīng)用于兩個(gè)方面：一是用于霍亂弧菌初步鑒別^【4】，二是用于區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌^【5-8】。
區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌的拉絲試驗(yàn)方法^【6】：取一張洗凈玻片，滴加25g/L氫氧化鉀水溶液一滴，根據(jù)菌落大小，從平板上挑取單個(gè)菌落或數(shù)個(gè)純培養(yǎng)菌落，置于氫氧化鉀滴液中研磨，經(jīng)15-60秒，自混懸液中輕輕提起接種環(huán)，仔細(xì)觀察；60秒內(nèi)混懸物中形成黏液狀并可拉成細(xì)絲（5mm以上）為陽性（對應(yīng)是革蘭氏陰性菌），60秒混懸物均勻不出現(xiàn)細(xì)絲者為陰性（對應(yīng)是革蘭氏陽性菌）。

為什么會是這樣的結(jié)果？
目前有兩種說法，第一種說法是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁在稀堿氫氧化鉀溶液中容易裂解，裂解后釋放出DNA，使氫氧化鉀溶液變?yōu)檎吵聿⑿纬烧辰z，反之，稀氫氧化鉀對此革蘭氏陽性菌無此作用^【5】；第二種說法是與細(xì)胞壁化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，在氫氧化鉀作用下革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂質(zhì)被皂化而形成粘稠物，致拉絲試驗(yàn)陽性，而革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁主要成分是粘肽，氫氧化鉀不能使其形成粘稠物，故拉絲試驗(yàn)陰性。革蘭氏陰性經(jīng)過氫氧化鉀溶液處理后再革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)菌體細(xì)胞壁溶解，呈模糊絮片狀，細(xì)胞壁有不同程度的損傷，接種適宜培養(yǎng)基上不能生長繁殖，而革蘭氏陽性菌無此現(xiàn)象^【6-7】。
其實(shí)，這兩種說法都是認(rèn)為與革蘭氏陽性和陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)成分有關(guān)，所以此法可用于區(qū)分革蘭氏陽性和陰性菌。但至于粘稠的物質(zhì)是DNA還是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁類脂物質(zhì)被氫氧化鉀皂化形成的，要闡明還有待進(jìn)一步的研究。
拉絲試驗(yàn)區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌的準(zhǔn)確性：相關(guān)研究報(bào)道表明^【6-8】，氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)結(jié)果與革蘭氏染色一致，二者符合率為100%。拉絲試驗(yàn)不但能正確區(qū)別革蘭氏陰性菌和陽性菌，還有助于復(fù)核革蘭氏染色結(jié)果的正確性，也是革蘭氏染色質(zhì)控的有力措施。
但拉絲試驗(yàn)結(jié)果也會受到試劑、菌量、菌型等因素影響^【6】，所以為了保證該試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，操作時(shí)需注意：
1）氫氧化鉀溶液的濃度在20-50g/L較佳^【8】，濃度過低會出現(xiàn)假陰性結(jié)果；
2）挑取菌量多少也很重要，菌落直徑1.5-3mm，取1/2-1個(gè)菌落，如菌落直徑小于1mm，取2-3個(gè)菌落，菌量過少反應(yīng)遲緩甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果；
3）光滑（S）型與粗糙(R）型菌落進(jìn)行試驗(yàn)， R型革蘭氏陰性菌雖能出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象但比S型革蘭氏陰性菌慢，且菌量過少時(shí)呈陰性反應(yīng)，因此，對于R型菌落的菌量宜相應(yīng)多取。
參考文獻(xiàn)：

1,Smith HL Jr. A Presumptive test for vibros: The “String" Test. Bull WHO,1970,42:817.
2,Shushan H.快速區(qū)分革蘭氏陽性與陰性厭氧菌的輔助方法。國外醫(yī)學(xué)：微生物學(xué)分冊，1982，1：47.
3,Agbonlahor DE, Odugbemi Phd To,Udofia PO. Differentiation of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria and Yeasts Using a Modification of the “String" Test. Amer J Med Techn,1983,49:177.
4,衛(wèi)生部《霍亂防治手冊》第六版(2013年)
5,張崑. 應(yīng)用氫氧化鉀法區(qū)分革蘭氏陰、陽性細(xì)菌的探討. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 1983年12卷4期:97.
6,解曉珍，田洪明，舒亦平，潘紹武.細(xì)菌拉絲試驗(yàn)的應(yīng)用探討. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1995年第17卷第1期：67-68.
7,張素萍，路高社. 拉絲試驗(yàn)的應(yīng)用及其影響因素的觀察. 北京軍qu醫(yī)藥 1995年第7卷第4期:312-313.
8,王秀芹.氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)與革蘭氏染色的應(yīng)用比較. 齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2004年第15卷第3期：54.

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